根據《廣東省科學技術廳關于2021年度廣東省科學技術獎提名工作的通知》(粵科函區字〔2021〕1104號)要求,現將我單位參與2021年度廣東省科學技術獎提名項目有關內容進行公示,詳見附件。 公示時間:2021年10月8日至2021年10月14日,共7日。 公示期間,如對公示內容有異議,請以書面形式向聯系人反映。以個人名義反映情況的,請提供真實姓名(并簽名)、聯系方式和反映事項的證明材料等;以單位名義反映情況的,請提供單位名稱(并加蓋公章)、聯系人、聯系方式和反映事項的證明材料等。凡匿名異議、超出期限異議的不予受理。 聯系人:黃麗雅 聯系電話:89236057 辦公地點:廣州市黃埔區科學城南翔一路62號 附件:參與2021年度廣東省科學技術獎提名項目信息公示表博濟醫藥科技股份有限公司2021年10月8日 附件: 參與2021年度廣東省科學技術獎提名項目信息公示表項目名稱腎主骨生髓理論防治退行性骨病的科學內涵研究及應用主要完成單位暨南大學廣州中醫藥大學第三附屬醫院河南省洛陽正骨醫院北京中醫藥大學廣州白云山敬修堂藥業股份有限公司博濟醫藥科技股份有限公司主要完成人(職稱、完成單位、工作單位)1.張榮華(教授、工作單位:暨南大學、完成單位:暨南大學、主要貢獻:項目負責人,全面組織、策劃、實施了整個項目的研究工作,對該項目技術創新點的第1-4項均做出了突出的貢獻。)2.朱曉峰(教授、工作單位:暨南大學、完成單位:暨南大學、主要貢獻:負責“腎主骨生髓”中醫內涵、補腎中藥藥效物質和機制、臨床實踐及應用部分,對該項目的技術創新點1、2、4做出了創新性貢獻)3.黃宏興(主任醫師、工作單位:廣州中醫藥大學第三附屬醫院、完成單位:廣州中醫藥大學第三附屬醫院、主要貢獻:對中醫“腎主骨生髓”中醫內涵、補腎中藥藥效物質及機制、臨床實踐及應用等部分作出了突出貢獻,對創新點1、2、4做出了重要貢獻)4.劉又文(主任醫師、工作單位:河南省洛陽正骨醫院,完成單位:河南省洛陽正骨醫院,主要貢獻:主要完成了中醫“腎主骨生髓”科學內涵,臨床實踐與應用部分,對項目組第1、4項技術創新點做出了重要貢獻)5.張東偉(教授、工作單位:北京中醫藥大學,完成單位:北京中醫藥大學,主要貢獻:主要完成了補腎中藥藥效物質和機制評價、藥物篩選平臺及活性成分驗證等部分內容,對創新點2、3做出了重要貢獻)6.江濤(高級工程師,工作單位:廣州白云山敬修堂藥業股份有限公司,完成單位:廣州白云山敬修堂藥業股份有限公司,主要貢獻:主要完成了系列名優中藥的二次開發及對整個研究成果的應用推廣,對應主要科技創新點3、4)7.馬仁強(副主任藥師,工作單位:博濟醫藥科技股份有限公司,完成單位:博濟醫藥科技股份有限公司,主要貢獻:主要完成了藥物篩選平臺的構建及活性物質的驗證、研究成果的應用及推廣,對應主要科技創新點3、4)8.楊麗(副教授、工作單位:暨南大學、完成單位:暨南大學、主要貢獻:主要完成了補腎中藥藥效物質和機制評價、藥物篩選平臺及活性成分驗證等部分工作,對創新點2、3做出了重要貢獻)9.王攀攀(主治醫師、工作單位:暨南大學、完成單位:暨南大學、主要貢獻:主要完成了“腎主骨生髓”中醫內涵、補腎很中藥藥效物質及機制的研究,對科技創新點1、2做出了貢獻)10.韓清民(主任醫師、工作單位:廣州中醫藥大學第三附屬醫院、完成單位:廣州中醫藥大學第三附屬醫院、主要貢獻:主要完成了藥物篩選平臺及臨床實踐及應用,對主要科技創新3、4做出了貢獻)11.萬雷(主任醫師,工作單位:廣州中醫藥大學第三附屬醫院、完成單位:廣州中醫藥大學第三附屬醫院、主要貢獻:主要完成了動物模型的構建、臨床實踐及應用部分,對應主要科技創新3、4)12.張虹(主任藥師、工作單位:河南省洛陽正骨醫院,完成單位:河南省洛陽正骨醫院,主要貢獻:主要完成了臨床實踐及推廣部分,對應科技創新點4)13.王麗麗(講師、工作單位:暨南大學、完成單位:暨南大學、主要貢獻:主要進行了補腎中藥藥效物質和機制部分研究,對科技創新點2做出了貢獻)14.李小云(助理研究員、工作單位:暨南大學、完成單位:暨南大學、主要貢獻:主要進了多層次退行性骨病模型的構建及活性物質藥效的驗證,對應科技創新點3)代表性論文專著目錄論文1:論文2:論文3:論文4:ömme>論文5:<淫羊藿苷促SD大鼠骨髓間充質干細胞骨向分化作用的實驗研究、中國中西醫結合雜志、2015年35卷、第一作者:傅淑平、通訊作者:張榮華>知識產權名稱專利1:<常春藤皂苷元及其衍生物或其鹽在制備治療骨性關節炎藥物中的應用>(ZL201710979238.7、發明人:馬仁強,陸靜云,馬藝華,葉治營、權利人:廣州博濟醫藥生物技術股份有限公司)專利2:<一種治療骨科疾病的原料藥及其制備方法>(ZL200810030360.0、發明人:馬仁強,翟濤、權利人:馬仁強)專利3:<一種治療骨質疏松癥的中藥復方制劑的檢測方法>(ZL201410637058.7、發明人:王文楚 ,嚴志標,彭紅英,陸頌規,江濤,陳雪華,楊濱賓,劉敏珊,程君璐、權利人:廣州白云山敬修堂藥業股份有限公司)專利4:<一種治療風寒濕痹的中藥組合物及其制備方法>(ZL201010290048.2、發明人:馬仁強,王廷春,黃娟,陳華香,梁麗娟,葉曉林、權利人:廣州博濟新藥臨床研究中心有限公司)專利5:<一種骨質疏松癥造模的輔助裝置>(ZL201922393403.8、發明人:張志海,汪悅東,高志杰,劉遠祥,林燕平,陳桐瑩,黃宏興,朱根福,萬雷、權利人:廣州中醫藥大學第三附屬醫院(廣州中醫藥大學第三臨床醫學院、廣州中醫藥大學附屬骨傷科醫院、廣州中醫藥大學骨傷科研究所)專利6:<帶藥物緩釋系統的骨折治療夾板>(ZL201720215345.8、發明人:黃宏興,蔡樺,梁祖建,萬雷、權利人:廣州中醫藥大學附屬骨傷科醫院)專利7:<一種常春藤皂苷元及其鹽的制備方法>(ZL201210157754.9、發明人:周清,黃娟,葉治營,馬仁強、權利人:上海砝碼斯醫藥生物科技有限公司)專利8:<一種常春藤皂苷元衍生物及其制備方法和應用>(ZL201210157859.4、發明人:馬仁強,石清慧,周瑞明,周清,黃娟、權利人:廣州博濟醫藥生物技術股份有限公司)專利9:<續斷總皂苷提取物及其提取方法和應用>(ZL200710031558.6、發明人:馬仁強,龐建新,劉璇,鄒紅、權利人:廣州博濟醫藥生物技術有限公司)專利10:<一種消腫止痛貼膏及其制備方法>(ZL201710337996.9、發明人:曾利杰,陳麗斯,江濤,彭紅英、權利人:廣州白云山敬修堂藥業股份有限公司)
2021-10-08北美時間8月20日,由濱會生物研發的抗腫瘤創新藥BS001(OH2)注射液獲得美國FDA許可,將在美國開展針對多種實體瘤的臨床試驗。博濟醫藥子公司美國漢佛萊助力該項目在美國FDA的IND申報工作。 據悉,BS001注射液是全球第一個選擇Ⅱ型單純皰疹病毒(HSV2)作為載體,并且進入臨床研究的溶瘤病毒藥物,也是中國第一個具有完全自主知識產權的新型溶瘤病毒株,首次登上溶瘤病毒免疫治療的世界舞臺。 濱會生物創始人、CEO劉濱磊博士表示,獲準在美開展臨床試驗是BS001注射液邁出的穩健而堅定的一步,開啟了創新藥研發的新里程。它標志著濱會生物從溶瘤病毒體系創新研究、病毒基因改造、規模生產到臨床已形成全方位的閉環。而這個閉環下的產品開發質量和安全性得到了國際高標準的認可,這既是濱會生物打造產學研一體化平臺的重大里程碑事件,也是中國溶瘤病毒免疫治療走向世界的新突破。 在濱會生物首席醫學官(CMO)王漢明看來,BS001注射液于2018年獲得NMPA批準IND,已相繼在20余家醫院開展了針對多種實體瘤的臨床試驗,安全性和有效性得到了充分驗證。此次BS001注射液獲得FDA IND許可,同時在美國進行研究開發,我們將充分發揮自身的CMC實力,加速創新產品上市,為全球腫瘤患者提供更先進、更多樣、更安全有效的治療方案。 作為CRO合作方,美國漢佛萊相關負責人對濱會生物獲批美國FDA臨床試驗許可表示衷心祝賀,感謝濱會生物自始至終的理解與信任!未來,美國漢佛萊將繼續深耕于中美雙報領域,助力中國藥企國際化發展,造福人類生命健康。關于博濟醫藥 臨床研究服務: 博濟醫藥擁有一支規模龐大、專業成熟的臨床研究隊伍,可提供包括醫學、項目管理、監查、稽查、數據管理和統計分析、生物樣本檢測在內的臨床試驗全流程解決方案。截至2020年,博濟醫藥服務的客戶超1000家,完成800多項臨床試驗項目,助力客戶獲得新藥證書60多項、生產批件超過80項。在有豐富的臨床試驗服務經驗,服務項目涵蓋臨床研究各個領域,在腫瘤、肝病、消化等創新藥領域擁有獨特的臨床服務體系。博濟醫藥在全國設有40多個臨床監查網點,與全國近600個臨床試驗機構展開合作,并運用ORACLE OC/RDC及CTMS系統,控制臨床數據采集的及時性、管理臨床試驗過程的規范性。
2021-08-23?近日,博濟醫藥子公司蘇州旭輝檢測有限公司(下稱旭輝檢測)正式通過中國合格評定國家認可委員會(CNAS)認可評審,獲得CNAS實驗室認可證書(證書注冊號:CNAS L15203)。這標志著旭輝檢測的實驗室具備了國家及國際認可的管理水平、檢測環境和檢測技術。 認可證書 據悉,中國合格評定國家認可委員會(China National Accreditation Service for Conformity Assessment)是由國家認證認可監督管理委員會批準設立并授權的國家認可機構,統一負責對認證機構、實驗室和檢查機構等相關機構的認可工作。通過CNAS實驗室認可、出具的認可能力范圍內的數據測試報告具有權威性和公信力。 旭輝檢測于去年9月份開始申報CNAS實驗室認可,經過實驗室全體員工的不懈努力,于今年6月份成功通過CNAS現場審查,并得到了審查老師的高度認可,CNAS實驗室認可資格已于2021年8月4日獲正式批準。 近年來,旭輝檢測在檢測分析領域努力探索,持續引進先進的檢測儀器設備。此次CNAS認證的通過將進一步提升旭輝檢測在檢測分析領域的地位和客戶認可度。關于旭輝: 蘇州旭輝檢測有限公司位于江蘇省昆山市小核酸基地產業園,由業內知名上市公司及分析領域資深專業人士投資建立,現有員工50余人,主要從事臨床生物樣品檢測分析服務(包括化學創新藥物藥代動力學研究和仿制藥一致性評價/生物等效性研究)、基于DMPK的藥物篩選研究以及IND申報的DMPK研究服務。 旭輝檢測自建立以來,已申報仿制藥生物等效性試驗項目近40個,其中13個品種已順利通過核查,8個品種成功拿到藥品補充申請批準。旭輝檢測積極的進行外部質量監控,已連續3年滿分通過全國藥代動力學實驗室室間質量評價并通過2019年度中國食品藥品檢定研究院的能力驗證。 關于博濟醫藥 臨床研究服務: 博濟醫藥擁有一支規模龐大、專業成熟的臨床研究隊伍,可提供包括醫學、項目管理、監查、稽查、數據管理和統計分析、生物樣本檢測在內的臨床試驗全流程解決方案。截至2020年,博濟醫藥服務的客戶超1000家,完成800多項臨床試驗項目,助力客戶獲得新藥證書60多項、生產批件超過80項。擁有豐富的臨床試驗服務經驗,服務項目涵蓋臨床研究各個領域,在腫瘤、肝病、消化等創新藥領域擁有獨特的臨床服務體系。 博濟醫藥在全國設有40多個臨床監查網點,與全國近600個臨床試驗機構展開合作,并運用ORACLE OC/RDC及CTMS系統,控制臨床數據采集的及時性、管理臨床試驗過程的規范性。
2021-08-17本文為系列文章《大分子生物分析概論》的第十四篇,旨在根據已發表的文獻資料,初步的介紹定量分析雙特異性抗體的LBA方法所面臨的挑戰。 由于內容篇幅較長,本文將采取上下篇形式進行推送,敬請垂注!《袁來如此》專欄系廣州博濟醫藥微信公眾號打造的科普學術專欄,內容均為博濟醫藥藥物研究中心資深科學顧問袁智博士原創。 與傳統(單特異性)的生物藥相比,雙特異性生物藥對其藥代動力學(PK)的表征提出了獨特的挑戰。在此背景下,開發生物藥的生物分析策略正在迅速演變,以支持這些不斷變化的藥物模式。 一般說來,生物分析策略應根據藥物的作用機制(mechanism of action,MOA)和開發階段定制。對于 mAb 藥物,用于分析藥代/毒代動力學(PK/TK),藥效動力學和免疫原性的分析方法通常分別為定量分析、“游離”和“總”藥物濃度、“游離”和“總”靶標濃度、抗藥物抗體(ADAs)和中和性 ADAs的開發和驗證。對于具有復雜結構的抗體衍生物(antibody derivatives),衍生物的每個功能域可能需要額外的一組檢測方法,從而可能導致測試方法的數量幾何級增長。 此外,與開發默認沒有生物轉化(biotransformation)的mAb相比,復雜的抗體衍生物更容易發生生物轉化,這意味著可能需要另一組測試方法來描述復雜抗體藥物的結構完整性及其生物轉化后的各種產物(biotransformed variants)。 配體結合式測試方法(LBA)是mAbs生物分析的主力軍,同時液相色譜-質譜方法(LC-MS)也在近年越來越受歡迎。這兩種分析技術也主要應用于抗體藥物及其衍生物的生物分析。 由于藥物模式的復雜性,通常需要多個 LBA/LC-MS 分析方法。當每個分析方法都有特定的取樣程序,而且并非所有的檢測可以在一個生物分析實驗室實施時,獨特的樣本采集、處理、儲存、運輸和分析條件,會造成復雜的后勤需求。因此,需要設計一種生物分析策略,用于表征雙特異性分子的PK特性,并研究其體內結構-功能關系。本文提供了若干相關案例研究和監管層面的預測。導論 近年來,蛋白質工程和生產方面的進展推動著生物制藥行業開發越來越復雜的蛋白質藥物,其能夠結合多個藥物治療靶標,故能夠提高療效和/或者減少劑量,用以降低毒性,使安全風險最小化,提高用藥的方便性和依從性等。雙特異性藥物被定義為基于抗體(antibody-based)或基于框架(scaffold-based)的蛋白質藥物,其包含一個以上的工程改造功能區域,該功能區域結合兩個或多個獨立的抗原靶點。本文集中關注雙特異性藥物的兩個獨特的功能域,其結合與疾病的發生和進展相關的蛋白質,而不考慮抗體骨(主)干(antibody backbone)的功能。 開發雙特異性生物藥的領域,基于并發展了傳統的單分子靶點的抗體免疫療法的框架,正在蓬勃發展,以靶向協同的分子途徑(target synergistic molecular pathways)來更有效地治療疾病。兩種雙特異性抗體,blinatumomab(Blincyto)和catumaxomab(Removab)已經在美國或歐盟批準上市,用于腫瘤適應癥的治療;這證明了這類藥物分子的應用價值。目前有60多種用于癌癥和其它疾病的新型雙特異性生物藥正在臨床開發之中。雙特異性生物藥分子 雙特異性分子可以以各種不同的結構呈現,利用抗體可用的各種結合域。這些結合域包括可變重鏈(VH)、可變輕鏈(VL)、單鏈分子(ScFv)和/或抗體的Fc域,可以組合使用這些結構域,以結合多個分子靶標。具有多個Fab結合域的雙可變域免疫球蛋白(dual-variable domain immunoglobulin,DVD -Ig)這樣的大型免疫球蛋白分子和較小的串聯ScFv結構域(diabody),在分子大小和結構上代表了兩個極端,它們都可通過各種蛋白質工程技術生產出來(圖1)。 圖1. 雙特異性分子的構造。本圖展示了三個雙特異性抗體的例子:1. Hetero-lg;2.雙可變結構域/dual variable domain;3.antibody-peptibody;這些代表了不同的分子大小,結構及復雜性。 目前的技術允許蛋白質結合域(protein binding domains)和抗體支架(antibody scaffolding)的多種組合,形成一系列獨特的藥物模式(drug modalities)。雙特異性藥物的幾個功能類別包括:與可溶性靶標結合以抑制或刺激相關功能、與細胞靶標結合以拮抗或刺激相關功能、與細胞靶標結合以招募免疫細胞以促進抗體依賴性細胞介導的細胞毒性(ADCC)功能。 對雙特異性分子獨特的結構和作用機制(MOA)給藥代動力學和藥理學(PK/PD)評估,體內結構-功能關系的確定以及臨床前和臨床藥物開發階段所需的生物分析支持帶來了新的挑戰。雙特異性抗體 雙特異性抗體是通過基因工程重組生產的抗體,由兩個不同的結合域(two distinct binding domains)組成,能夠結合兩種不同的抗原或同一抗原的兩個不同表位。它們可以分為兩個主要類別,即帶有或缺少Fc區域的兩類。關于生物分析支持, FDA關于雙特異性抗體開發的指南指出:可能需要開發多種PK定量方法,以定量總(total),結合(bound)和未結合(unbound)的雙特異性抗體的濃度;也可能需要多個免疫原性測試方法,來測試對雙特異性抗體不同結構域的免疫反應。 由于雙特異的性質,雙特異性抗體的未結合或“游離”PK定量方法可以包括三個測定方法:一個雙功能方法同時測定兩個活性結合域(active binding domains)和兩個單功能方法分別測定二個結合域中之一。雙功能方法分別使用兩個靶標蛋白作為捕獲和檢測試劑。單功能方法使用一個靶標蛋白作為捕獲試劑,而使用抗人類IgG作為檢測試劑。通常,在解釋檢測結果時應謹慎,因為單特異性方法缺乏特異性,故也能檢測到雙功能分子。 雙特異性抗體的定量PK分析方法面臨生物轉化(biotransformation)的重大挑戰,因此,通常定制開發方法以定量某個功能域生物轉化的程度。獨特的雙特異性構造可能造成意外的生物轉化路徑,并可能使PK行為復雜化。雙特異性生物藥的PK/PD 雙特異性分子增加了PK建模的復雜性,例如,表征靶向介導的藥物處置需要考慮兩個靶點的表達,它們以不同的頻率出現在不同的細胞類型上。“游離”藥物濃度與“總”藥物濃度的定量,對于PK/PD建模至關重要,特別是當涉及可溶性靶點時;但是,由于靶標蛋白在體內的不同表達模式(expression patterns),藥物定量分析可能會變得更加復雜。在絕大多數的臨床研究中,藥物濃度是在所謂的“中央隔室central compartment”或系統循環(systemic circulation)中,以血漿或血清樣本的形式,測定的,這在很大程度上是由于易于從服用藥物的受試者中取樣。根據幾十年累積的科學數據,系統藥物濃度(systemic drug concentrations)反映了藥物在靶標作用部位的濃度。血液病是一個例外,但即使是血液病也通常含有固體組織的部分。系統藥物濃度和作用地點(site-of-action)的藥物濃度之間的關系會因作用地點的不同而不同,但適當的動物模型數據通常為人體狀況提供了可靠的模型。 由于藥理學或藥效學響應依賴于全身藥物濃度,正確理解PK-PD關系對于預測達到預期響應的劑量和暴露量極為有用。同樣重要的是,確定可能發生在每個獨特的雙特異性分子上的任何潛在的體內生物轉化(in vivo biotransformation),并徹底表征不同的藥物在暴露量和活性方面的差異??傮w來說,這些表征有助于理解藥物的暴露量-響應關系,并提供了,基于藥物變構體活性,優化劑量設計方案。 PK評估是非臨床毒理學研究和臨床開發的必然需求,在非臨床疾病模型評估中也發揮著重要作用;一般在非臨床疾病模型評估中,研究藥物劑量-響應的特性,用以選擇先導藥物。非臨床毒理學研究中的全身暴露量數據,可用于確定首次對人(FIH)研究的安全起始劑量,該起始劑量是基于此類安全研究確定的暴露量余量(exposure margin)。暴露量余量由未觀察到不良反應水平(NOAEL)的動物暴露量與選定人體劑量的預期暴露量的比值確定,通常設定為比NOAEL預期的人體等效劑量(HED)低10倍。由于雙特異性分子可靶向多種生理或病理途徑,因而可能具有更強的藥理和/或毒理學作用;故監管機構可能要求制藥商使用“最低預期生物效應水平”(MABEL)模型來選擇FIH劑量,這意味著需要比基于NOAEL更低的起始劑量。臨床研究中較低的起始劑量,意味著可能需要提高PK方法的靈敏度;考慮到雙特異性分子的復雜性,這可能是一個挑戰。 PK定量分析方法 為了支持符合藥物預期用途的PK數據的可靠性和有效性,監管機構希望制藥商,對所有的GLP研究/關鍵臨床試驗,使用經過驗證的分析方法來定量藥物濃度。監管部門為生物分析方法的驗證提供了具體的指南,這些指南在全球各監管機構中普遍一致。這些指南文件清楚地闡明了對分析方法參數的性能及其可接受值的監管期望,包括收集,儲存和分析過程中研究樣本的完整性。關于檢測試劑的討論,特別是捕獲和檢測試劑的選擇,分析格式和技術平臺,以及用于PK表征和PK/PD相關性分析的相關待測物,都可以在科學文獻中找到。對于靶標在血液循環中的藥物(這些靶標可在血清或血漿樣本中形成藥物-靶標復合物),關于應當測定的最相關的藥物形式(不包括生物轉化物/ biotransformants)仍然存在爭議:“總體”(結合了 + 未結合靶標的藥物)或“游離部分”或“活性部分”(未結合靶標的部分)。關于總藥物濃度和游離藥物濃度的問題最好根據靶標的已知狀況,藥物的MOA和特征,項目團隊的意見,技術可行性,以及監管反饋(如果需要的話),按個案處理的原則解決。最近有文獻討論了相關問題。LBA定量方法 生物分析策略的選擇可以根據藥物特定的開發階段而有所不同。例如,在非臨床物種中研究人類蛋白藥物, 使用不與非人類物種交叉反應的,針對人類蛋白的試劑,特別是非人靈長類同源物,例如,重組人源化單克隆抗體(recombinant humanized monoclonal antibody,rhuMabs),可以開發一種通用的,快速且經濟的PK分析方法來測定總藥物濃度,以支持全面的毒理學評價。然而,這種方法不能用在臨床研究中,更加藥物特異性試劑,例如,靶標抗體和anti-idiotypic抗體,更可能是必要的:使用通用試劑與內源性分子發生交叉反應會干擾蛋白藥物濃度的定量,而測定游離藥物的濃度與建立PK-PD關系息息相關。非臨床和臨床生物分析策略的另一個問題是,使用針對每個靶標結合位點(target binding site)的試劑,例如針對每個靶標結合域的靶標和/或anti-idiotypic抗體的組合,來測定完整的雙特異性分子是否最有價值。Anti-idiotypic 抗體 當一種抗體與另一種抗體的idiotope結合時,它被稱為抗idiotope抗體??贵w的可變部分,包括獨特的抗原結合位點,被稱為idiotope。Idiotopes內的表位組合對于每種抗體都是獨一無二的(圖2).由于目前開發的大多數單克隆抗體藥物是人源的或人源化的,因此最可能誘導抗藥物抗體(ADA)的免疫原性表位(immunogenic epitopes),存在于提供大多數結合接觸面(binding contacts)的hypervariable complementarity determining regions(CDR)之內。可以生成抗idiotypic抗體,特異性地結合一個單克隆抗體藥物。這些高度特異性的抗體可用于,以不同測試格式,開發藥代動力學(PK)定量方法,以測定臨床前和臨床樣本中的游離藥或總藥物的濃度,或在ADA測試中作為陽性對照等。圖2. 抗體idiotope:抗體可變區域的,獨特的抗原決定因素(antigenic determinants)的集合。 在這方面,藥物的MOA在選擇合適的分析方法時很重要,特別是在藥物活性依賴于雙特異性藥物對兩個靶點的同時作用的情況下??笴D3/抗腫瘤靶標雙特異性藥物就是一個例子:測定完整的,有活性的雙特異性分子是充分表征該藥物的最佳策略。反之,如果藥物活性依賴于一個靶點的參與,而另一個靶點的參與只是增強了藥物活性, 那么,測定完整藥物可能就不那么重要了;此時,只使用一種藥物特異性試劑 (例如,單臂靶向/1-arm target,單臂/1-arm延長 PK或增加暴露量) 可能是合理的策略。另一種方法的一個例子是評估catumaxomab抗體的PK: 該PK分析方法利用了該抗體藥物是小鼠/大鼠的嵌合結構體,使用了特異性的antispecies immunoglobulin的捕獲/檢測試劑。這里,使用了一個針對藥物的嵌合結構的混合通用分析格式(mixed generic assay format);該方法特異性來自嵌合結構,而不涉及CDRs。這種方法基于兩個假設: 首先,單克隆抗體(mAb)藥物在體內通常非常穩定。其次,靶標蛋白沒有可檢測到的可溶性形式。因此,該PK分析方法可以測定血液循環中游離的catumaxomab單抗,這是符合其預期用途的。一般來說,默認的生物分析策略是利用雙特異性藥物的雙特異性,但需要認識到開發這樣的試劑是耗時的和有挑戰的;并且可能在藥物發現甚至非臨床研究階段還沒有這樣的試劑。下面將更詳細地考量各種選擇。PK定量方法的設計完整雙特異性分子的分析方法 完整雙特異性分子定量的目的是測定生物基質中完整的雙特異性分子。該測試只測定有活性雙特異性分子,其沒有任何功能區域被抗藥物抗體(ADA)或血液循環中的靶點切斷(clipped off)或阻斷(blocked)。完整分子的檢測方法通常需要使用靶標抗體和/或anti-idiotypic抗體,以測定包含可結合捕獲和檢測試劑這兩個功能域的分子。在評估體內或體外穩定性時(假設試劑可用),建議采用完整分子的分析方法。完整分子定量的測試格式如圖3A所示。 這種測試格式使用兩個靶標分子或兩個完全中和性的anti-idiotypic抗體,或兩者的組合。最近, LC-MS,結合affinity pull-down(使用靶標或anti-idiotypic抗體)以分離待測物,已用于表征的生物基質中的藥物完整分子。Affinity pull-down是一種類似于免疫沉淀(immunoprecipitation)的小規模親和純化技術,只是抗體也可以被其它親和系統所取代。 這是一種sequential方法:首先,使用anti-idotypic抗體來下拉(pull down)雙特異性藥物的游離形式;然后,用LC-MS法進行定量。利用這種形式,可以確定雙特異性分子的游離濃度。然而,在方法開發過程中需要考慮幾個關鍵因素: 該測試格式必須設計好,以避免潛在的空間位阻效應(steric hindrance)。一些雙特異性分子被設計為靶向一個可溶性分子和一個與細胞結合的分子(細胞表面受體)。這種雙特異性分子被明確設計為與兩個靶點同時相互作用,以發揮其預期的藥理活性。然而,雙特異性分子和檢測試劑在檢測環境中可能有不同的相互作用,換句話說,在塑料容器表面可能表現出不同的相互作用。因此,應該理解和謹慎的處理空間位阻效應。例如,從位阻效應研究中收集的數據,例如,在Octet平臺上考查域結合干擾(domain binding interferences)的數據,可能指向選擇一個特定的捕獲和檢測順序,以避免不必要的空間位阻效應; 一些雙特異性分子,通過協同作用,具有很高的藥效學效力(highly pharmacologically potent),這可能意味著只需要非常低的臨床劑量。因此, 基于已知的劑量-響應數據和劑量模型(dose modelling)的分析方法靈敏度將會是一個重要的考量指標; 與傳統的單特異性抗體相比,雙特異性分子更有可能出現體內生物轉化(biotransformation),即體內不穩定性(in vivo instability)。生物轉化不僅可能影響雙特異性分子的活性,而且還可能影響定量雙特異性分子的可靠性。因此,完全中和性,anti-idiotypic抗體或靶標分子(圖3A)有可能允許檢測潛在的生物轉化(consequential biotransformation); 圖3. 用于定量雙特異性分子的不同測試格式和試劑。(A)完整分子的測定方法:使用靶標蛋白X和靶標蛋白Y作為檢測試劑,測定完整雙特異性分子的濃度。(B) 功能域分析:采用抗Fc抗體和靶標Y蛋白作為檢測試劑來測量功能域Y的濃度。(C)功能域分析:采用抗Fc抗體和X靶標蛋白作為檢測試劑來測量功能域X的濃度。(D)總濃度測定方法:通過使用兩種抗Fc抗體作為測試試劑來測定雙特異性分子的所有可溶形式。 與單特異性生物藥分子類似,如常規的單克隆抗體,ADA可以通過阻斷捕獲或檢測試劑與藥物的結合來干擾對雙特異性分子的定量(注意不要與改變的藥物清除率相混淆)。此外,一個結構域可能是immunodominant;那么取決于測試格式,這可能會導致PK分析結果的差異。另外,也許除了內源性的IgG4分子之外,雙特異性分子所固有的新穎,非天然結構,可能使雙特異性分子比單特異性分子更容易誘發ADA反應,這是免疫原性風險評估的一個考慮因素。功能域分析(functional domain assay) 功能域分析是測定一個功能域的濃度,此格式可用于展示相關的單一功能域的濃度。當雙特異性的MOA使得藥物分子的一部分(a partial molecule)保留部分活性時(如可溶性靶標,融合蛋白,或肽激動劑),這些檢測顯得尤為重要。功能域分析的目的是確定哪個功能域是有活性的,因此,可用于解釋與ADA的形成或生物轉化相關的功能喪失。 單域測試格式的設計如圖3B和3C所示。該方法特意使用藥物靶標,或抑制性anti-idiotypic抗體來分析雙特異性分子的游離結構域(free domain), 并與抗Fc或抗框架(anti-framework)抗體,作為捕獲或檢測試劑,聯用。這些分析方法可用于藥物開發的任何階段。有時,基于細胞的測試方法可以用于測量單個功能域,如blinatumomab情況。 圖3. 用于定量雙特異性分子的不同測試格式和試劑。(A)完整分子的測定方法:使用靶標蛋白X和靶標蛋白Y作為檢測試劑,測定完整雙特異性分子的濃度。(B) 功能域分析:采用抗Fc抗體和靶標Y蛋白作為檢測試劑來測量功能域Y的濃度。(C)功能域分析:采用抗Fc抗體和X靶標蛋白作為檢測試劑來測量功能域X的濃度。(D)總濃度測定方法:通過使用兩種抗Fc抗體作為測試試劑來測定雙特異性分子的所有可溶形式??倽舛确治龇椒ǎ╰otal assay) 總體測定法(total assay)用于測定雙特異性分子的所有可溶形式。這種測試格式可用于顯示雙特異性分子的存在,而不考慮任何結構或功能的變化。該分析方法通常用于測定蛋白質的主(骨)干(backbone)結構,如Fc結構域。但這可能并不適用于所有的構造;取決于構造的性質,也不一定適用于所有的分子變構體,例如,在臨床研究中rhuMab雙特異性藥物??傮w測定法應當耐受ADA和與靶標的結合(target binding)。圖3D描述了總體測定法,其中兩個與不同表位結合的抗人Fc抗體可以用作捕獲和檢測試劑。 圖3. 用于定量雙特異性分子的不同測試格式和試劑。(A)完整分子的測定方法:使用靶標蛋白X和靶標蛋白Y作為檢測試劑,測定完整雙特異性分子的濃度。(B) 功能域分析:采用抗Fc抗體和靶標Y蛋白作為檢測試劑來測量功能域Y的濃度。(C)功能域分析:采用抗Fc抗體和X靶標蛋白作為檢測試劑來測量功能域X的濃度。(D)總濃度測定方法:通過使用兩種抗Fc抗體作為測試試劑來測定雙特異性分子的所有可溶形式。 同樣,單一多克隆抗人IgG試劑也可用作捕獲和檢測試劑。但此方法只用于非臨床研究。對于測量總體藥物濃度, LC-MS非常有用,特別是當沒有特定的試劑可用時??傮w測定法可與“完整intact”或“有效active”藥物測定法,結合使用,或同時使用兩者,以評估體內外(in vivo /ex vivo)的穩定性,以及生物轉化(biotransformation)對結構-功能關系的影響,例如,某些deamidation或氧化反應可能破壞藥物與靶標的結合。 PK樣本中生物環境的復雜性為使用哪一種定量方法增加了另一層挑戰。生物分析方法的應用是從藥物發現和臨床前安全性評估期間的動物研究開始的,持續到臨床開發,并延伸到上市后的生命周期管理(即附加適應癥和/或組合療法)。正如前面所指出的,不同的分析策略可以在不同的開發階段使用;當體內結構-功能關系確立之后,可以在藥物發現和開發的整個過程中開發和使用單一的定量分析方法。但是,需要對分析方法的生命周期管理有特殊考慮,以便將來自多個物種和不同目標患者群體的PK/PD知識整合到所探索適應癥中去。雙特異性分子的方法驗證和認證(method validation & qualification) 對雙特異性分子的方法驗證和認證與其他大分子一樣,包括精密度和準確度,稀釋線性度,選擇性,干擾和特異性,以及穩定性測試,以確保數據的穩健性和完整性。然而,由于雙特異性分子的性質,如上所述,在開發完整分子的分析方法時,對這兩個結構域的特異性和分析干擾的評估都是必要的。特別聲明 本文如有疏漏和誤讀相關指南和數據的地方,請讀者評論和指正。所有引用的原始信息和資料均來自已經發表學術期刊, 官方網絡報道, 等公開渠道, 不涉及任何保密信息。參考文獻的選擇考慮到多樣化但也不可能完備。歡迎讀者提供有價值的文獻及其評估。參考文獻1.Zhu, L, et al. 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