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近期，廣東省藥品監(jiān)督管理局組織GMP認(rèn)證專家對(duì)博濟(jì)醫(yī)藥子公司廣州博濟(jì)生物醫(yī)藥科技園（下稱：博濟(jì)科技園）有限公司口服固體車間片劑生產(chǎn)線進(jìn)行了為期四天的GMP符合性現(xiàn)場(chǎng)檢查，檢查結(jié)論為通過現(xiàn)場(chǎng)核查。這標(biāo)志著博濟(jì)科技園片劑生產(chǎn)線符合《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》（2010年修訂）要求，具備藥品上市生產(chǎn)能力，可為客戶提供優(yōu)質(zhì)的CDMO服務(wù)。經(jīng)過詳細(xì)全面的現(xiàn)場(chǎng)和文件體系檢查，專家組對(duì)博濟(jì)科技園GMP規(guī)范執(zhí)行情況有了全面了解，對(duì)博濟(jì)科技園目前的質(zhì)量管理及片劑生產(chǎn)管理表示認(rèn)可，整體評(píng)估認(rèn)為博濟(jì)科技園藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理體系完善，風(fēng)險(xiǎn)可控，運(yùn)行有效，最終順利通過片劑生產(chǎn)線的GMP符合性現(xiàn)場(chǎng)考核。檢查結(jié)論顯示，經(jīng)對(duì)廣州博濟(jì)生物醫(yī)藥科技園有限公司口服固體車間片劑生產(chǎn)線進(jìn)行藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范符合性檢查（編號(hào)：粵20210035），本次檢查范圍“片劑”符合《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（2010年修訂）》要求，同意該車間和生產(chǎn)線投入藥品上市生產(chǎn)。通過GMP符合性檢查，標(biāo)志著博濟(jì)生物醫(yī)藥科技園片劑生產(chǎn)線符合《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》（2010年修訂）要求，具備藥品上市生產(chǎn)能力。關(guān)于博濟(jì)生物醫(yī)藥科技園：博濟(jì)生物醫(yī)藥科技園位于廣州市增城國(guó)家經(jīng)濟(jì)技術(shù)開發(fā)區(qū)核心區(qū)內(nèi)，注冊(cè)資本1.22億元，占地面積33300㎡，園區(qū)規(guī)劃總建筑面積10萬㎡，建成后將擁有10000㎡的研發(fā)公共服務(wù)平臺(tái)，20000㎡的CDMO生產(chǎn)基地以及70000㎡的孵化場(chǎng)地。CDMO生產(chǎn)基地?fù)碛修k公大樓、口服固體制劑車間、液體制劑車間、中藥前處理和提取車間、化學(xué)原料藥合成車間以及消防、動(dòng)力、污水處理站等配套設(shè)施。 藥物研發(fā)生產(chǎn)公共服務(wù)平臺(tái)（CDMO），已取得片劑、硬膠囊劑、顆粒劑、散劑、中藥前處理和提取、原料藥的生產(chǎn)許可證，可提供藥物工藝放大研究、臨床用藥生產(chǎn)、MAH落戶、中試和商業(yè)批生產(chǎn)、創(chuàng)新藥項(xiàng)目投融資等服務(wù)。 科技園已獲得廣州市科技企業(yè)孵化器生物醫(yī)藥專業(yè)孵化器登記認(rèn)定，擁有4大GMP中試平臺(tái)以及檢測(cè)中心，能為在孵企業(yè)提供專業(yè)化的實(shí)驗(yàn)條件、中試和專業(yè)化的技術(shù)服務(wù)。建成后可容納創(chuàng)新型企業(yè)達(dá)140家，是目前增城唯一的生物醫(yī)藥領(lǐng)域?qū)I(yè)孵化器。未來，博濟(jì)生物醫(yī)藥科技園將成為增城區(qū)生物醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)桿，集研發(fā)、中試、生產(chǎn)一站式服務(wù)平臺(tái)，為增城區(qū)培育一批具有競(jìng)爭(zhēng)力的生物醫(yī)藥創(chuàng)新企業(yè)。

2021年5月17日，以“論劍新藥 賦能福田”為主題的首屆福田生物醫(yī)藥創(chuàng)新論壇在深圳市福田生物醫(yī)藥研發(fā)公共服務(wù)平臺(tái)隆重舉行。本次論壇由廣東省生物醫(yī)藥創(chuàng)新技術(shù)協(xié)會(huì)主辦，博濟(jì)醫(yī)藥子公司深圳博瑞醫(yī)藥科技有限公司、灣區(qū)新藥匯承辦，旨在匯聚粵港澳大灣區(qū)創(chuàng)新藥研發(fā)不同領(lǐng)域?qū)＜覍W(xué)者，探討創(chuàng)新藥領(lǐng)域最新進(jìn)展，為大灣區(qū)生物醫(yī)藥發(fā)展建言獻(xiàn)策，共商契機(jī)，暢談未來。 廣東省藥監(jiān)局副局長(zhǎng)嚴(yán)振，行政許可處副處長(zhǎng)羅玉冰，廣東省藥監(jiān)局原副局長(zhǎng)陳德偉，廣東省生物醫(yī)藥創(chuàng)新技術(shù)協(xié)會(huì)會(huì)長(zhǎng)、健康元董事長(zhǎng)特別助理陸文岐，廣東省生物醫(yī)藥創(chuàng)新技術(shù)協(xié)會(huì)執(zhí)行會(huì)長(zhǎng)朱少璇，暨南大學(xué)藥學(xué)院院長(zhǎng)丁克，福田引導(dǎo)基金董事長(zhǎng)王仕生，博濟(jì)醫(yī)藥董事長(zhǎng)王廷春，廣東萊佛士制藥技術(shù)有限公司董事長(zhǎng)葉偉平，深圳博瑞醫(yī)藥總經(jīng)理王建華，F(xiàn)DA專家學(xué)會(huì)理事長(zhǎng)、埃格林醫(yī)藥董事長(zhǎng)杜濤，北京加科思新藥研發(fā)有限公司研發(fā)總裁胡邵京，前FDA資深審評(píng)專家竇金輝，深圳艾欣達(dá)偉醫(yī)藥科技有限公司董事長(zhǎng)段建新，深圳塔吉瑞生物醫(yī)藥有限公司董事長(zhǎng)王義漢，深圳君圣泰生物技術(shù)有限公司創(chuàng)始人劉利平，同寫意創(chuàng)始人程增江，廣東眾生睿創(chuàng)生物科技有限公司總裁陳小新，深圳晶泰科技有限公司首席科學(xué)家張佩宇，深圳博瑞醫(yī)藥副總經(jīng)理袁智、涂正超等近20位嘉賓與來自政界、學(xué)術(shù)界、企業(yè)界近200名專家學(xué)者共襄此次盛會(huì)。會(huì)議伊始，嚴(yán)振代表廣東省藥監(jiān)局發(fā)表致辭。嚴(yán)振在致辭中向與會(huì)專家學(xué)者介紹了廣東省鼓勵(lì)生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)發(fā)展的相關(guān)政策，并對(duì)福田生物醫(yī)藥研發(fā)公共服務(wù)平臺(tái)發(fā)展建設(shè)表示了支持，希望福田生物醫(yī)藥研發(fā)公共服務(wù)平臺(tái)不斷加快產(chǎn)學(xué)研的融合發(fā)展，完善創(chuàng)新藥的全產(chǎn)業(yè)鏈建設(shè)，成為引領(lǐng)福田、深圳乃至大灣區(qū)和廣東省生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新發(fā)展的標(biāo)桿。同時(shí)勉勵(lì)廣大與會(huì)者利用好大灣區(qū)政策紅利和創(chuàng)新驅(qū)動(dòng)產(chǎn)業(yè)戰(zhàn)略，實(shí)現(xiàn)廣東省生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)的跨越式發(fā)展。隨后，朱少璇、王仕生分別代表主辦單位和福田有關(guān)部門發(fā)表致辭。朱少璇則以時(shí)下新聞報(bào)道為例，直面廣東省在生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)領(lǐng)域的發(fā)展短板，并向與會(huì)者拋出了面對(duì)長(zhǎng)三角，大灣區(qū)如何彎道超車的話題。她表示，去年廣東省發(fā)布多個(gè)針對(duì)于生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)發(fā)展的利好新政，并將生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)上升為全省發(fā)展的支柱產(chǎn)業(yè)，相信在政府、企業(yè)、資本、技術(shù)、人才等資源不斷匯聚下，廣東省生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)的未來定會(huì)迎來大發(fā)展的新時(shí)代。王仕生在講話中談及了福田針對(duì)于生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)的各項(xiàng)舉措，重點(diǎn)就利用資本力量實(shí)現(xiàn)企業(yè)高速發(fā)展的相關(guān)情況進(jìn)行了介紹。他表示，希望通過福田區(qū)與深圳博瑞醫(yī)藥合力打造的福田生物醫(yī)藥研發(fā)公共服務(wù)平臺(tái)，推進(jìn)產(chǎn)業(yè)、科研、金融與政府、企業(yè)的有效對(duì)接，從而帶動(dòng)產(chǎn)業(yè)協(xié)同發(fā)展。隨后，丁克博士便以《激酶抑制劑-新藥研發(fā)的長(zhǎng)青之樹》展開了演講，正式為這場(chǎng)含金量頗高的學(xué)術(shù)論壇拉開了序幕。演講伊始，丁克就向與會(huì)者拋出了激酶抑制劑是“強(qiáng)弩之末”還是“不老神話”的命題。在他看來，激酶抑制劑雖然有很多上市藥物以及臨床在研項(xiàng)目，但仍有很大的開發(fā)潛力，如有一半以上激酶靶標(biāo)目前還未涉及，且現(xiàn)有藥物長(zhǎng)期使用后導(dǎo)致的耐藥突變以及藥物的選擇性都值得業(yè)界進(jìn)一步研究。此外，激酶的非催化功能也與疾病有著千絲萬縷的聯(lián)系，這也是未來激酶藥物研發(fā)的重要方向之一。作為前FDA評(píng)審專家，杜濤博士在其演講中就FDA近年來的發(fā)展變化、審評(píng)數(shù)量、孤兒藥以及國(guó)內(nèi)創(chuàng)新藥研發(fā)、審批速度、醫(yī)保支付等方面闡述了自己的觀點(diǎn)，并分析了歐洲、澳洲、日韓等國(guó)家在新藥審評(píng)審批的政策。在他看來，美國(guó)無論從市場(chǎng)上還是從政策上，都是國(guó)內(nèi)藥企海外發(fā)展的最佳選擇，中美雙報(bào)已成為國(guó)內(nèi)藥企海外發(fā)展的重要路徑，選擇競(jìng)爭(zhēng)性藥品少、臨床試驗(yàn)數(shù)量少、開發(fā)難度小的管線將成為中國(guó)藥企走向國(guó)際化發(fā)展的捷徑。而這樣的觀點(diǎn)也與胡邵京不謀而合。在論壇中，胡邵京以《中國(guó)創(chuàng)新藥的國(guó)際化》為題，談及了自己對(duì)中國(guó)創(chuàng)新國(guó)際化發(fā)展的觀察。在他眼中，雖然麥肯錫報(bào)告將中國(guó)列入了世界創(chuàng)新藥領(lǐng)域的第二梯隊(duì)，但中國(guó)知名國(guó)際化藥企少，靶點(diǎn)不新穎、高端產(chǎn)業(yè)人才稀缺、國(guó)際多中心臨床試驗(yàn)不足等問題均是橫亙?cè)谥袊?guó)創(chuàng)新藥產(chǎn)業(yè)發(fā)展面前的重要掣肘。“新冠疫苗獲得世衛(wèi)組織使用認(rèn)證，這是中國(guó)藥企實(shí)現(xiàn)國(guó)際化發(fā)展的里程碑事件，回溯新冠疫苗的研發(fā)過程，國(guó)際多中心臨床試驗(yàn)是其重要一環(huán)。希望中國(guó)創(chuàng)新藥以此次新冠疫苗里程碑事件為契機(jī)，未來能有更多的創(chuàng)新藥研發(fā)實(shí)現(xiàn)國(guó)際多中心臨床試驗(yàn)，能有更多的創(chuàng)新藥在國(guó)際市場(chǎng)上市。”胡邵京說。深圳塔吉瑞生物醫(yī)藥有限公司董事長(zhǎng)王義漢以《挑戰(zhàn)治愈：全新機(jī)制Bcr/Abl變構(gòu)抑制劑的開發(fā)》為題向與會(huì)者分享TGRX-678的研發(fā)背景以及設(shè)計(jì)理念。“國(guó)內(nèi)目前沒有第三代BCR/ABL抑制劑，且三代藥物副作用強(qiáng)。”為了解決該問題，他選擇了一條新的、更具挑戰(zhàn)性的方法：變構(gòu)抑制劑。經(jīng)過不懈的努力，TGRX-678終于研發(fā)成功并推向臨床，有潛力替代現(xiàn)有的藥物并實(shí)現(xiàn)慢性粒細(xì)胞白血病的功能性治愈。前FDA資深審評(píng)專家竇金輝博士則以《淺析中藥、天然藥和FDA植物藥的研發(fā)理念及策略》為題，向與會(huì)者介紹了中藥走向國(guó)際的主要途徑并分享了相應(yīng)的研發(fā)實(shí)例，為中藥國(guó)際化提供了思路和指導(dǎo)。深圳艾欣達(dá)偉醫(yī)藥科技有限公司董事長(zhǎng)段建新則專注于靶向小分子偶聯(lián)藥物研發(fā)，他在論壇上發(fā)表了靶向化療藥物的研發(fā)理念和設(shè)計(jì)思路的演講，并分享了之前研發(fā)項(xiàng)目TH-302在三期臨床失敗，由此帶來的啟發(fā)與思考，并進(jìn)一步地產(chǎn)生了目前艾欣達(dá)偉核心項(xiàng)目：AST-3424，該化合物表現(xiàn)出優(yōu)異的體內(nèi)外活性，是靶向AKR1C3的廣譜抗癌藥物，目前已進(jìn)入臨床研究。深圳博瑞醫(yī)藥副總經(jīng)理袁智博士則就《大分子生物分析的發(fā)展趨勢(shì)》同與會(huì)者分享自己的觀點(diǎn)。他首先介紹了“深圳市福田區(qū)生物醫(yī)藥研發(fā)公共服務(wù)平臺(tái)”，提出了該平臺(tái)志在“打造大灣區(qū)生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)發(fā)展發(fā)動(dòng)機(jī)”的愿景。此外，袁智還介紹了大分子藥物生物分析行業(yè)面臨的挑戰(zhàn)，并介紹了相應(yīng)的實(shí)例，最后對(duì)大分子生物分析作出了展望。深圳博瑞醫(yī)藥副總經(jīng)理涂正超博士則以《高通量篩選及新藥研發(fā)》為題，向與會(huì)者介紹了深圳市福田區(qū)生物醫(yī)藥研發(fā)公共服務(wù)平臺(tái)在新藥高通量篩選方面的能力以及所擁有的先進(jìn)設(shè)備。在論壇上，有一位嘉賓備受尊重，他就是廣東省藥監(jiān)局原副局長(zhǎng)陳德偉。陳德偉同與會(huì)者分享了自己多年前看到長(zhǎng)三角地區(qū)生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)集聚發(fā)展，產(chǎn)業(yè)鏈完備的場(chǎng)景，羨慕之余感慨廣東省在生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)方面的不足。“如今這樣的硬件短板正在逐步補(bǔ)上，廣東省的生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)園區(qū)在深圳、廣州、珠海、中山、東莞遍地開花，產(chǎn)業(yè)供應(yīng)鏈建設(shè)也逐漸完備，相信在各方共同努力下，廣東生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)定會(huì)實(shí)現(xiàn)高質(zhì)量的快速發(fā)展。”在整個(gè)論壇最后的圓桌討論環(huán)節(jié)，葉偉平、朱少璇、陸文岐、程增江、劉利平、陳小新、張佩宇等大咖悉數(shù)登場(chǎng)，共同圍繞《創(chuàng)新藥快速發(fā)展的“灣區(qū)路徑”》這一話題展開探討。討論中，人才引進(jìn)、管線選擇、風(fēng)險(xiǎn)規(guī)避、資源集聚、差異化立項(xiàng)都成為了焦點(diǎn)內(nèi)容，各位嘉賓不吝言辭，各抒己見，氣氛頗為熱烈，引發(fā)了會(huì)場(chǎng)多次掌聲。整場(chǎng)論壇一直持續(xù)到當(dāng)晚7時(shí)許，論壇結(jié)束后，眾多現(xiàn)場(chǎng)觀眾意猶未盡，紛紛駐足會(huì)場(chǎng)，與演講嘉賓深入交流，暢談大灣區(qū)生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)發(fā)展大計(jì)。深圳博瑞及福田生物醫(yī)藥研發(fā)公共服務(wù)平臺(tái)展示關(guān)于博瑞醫(yī)藥：深圳博瑞醫(yī)藥是博濟(jì)醫(yī)藥全力打造的創(chuàng)新藥研發(fā)CRO服務(wù)子公司，運(yùn)營(yíng)福田生物醫(yī)藥技術(shù)平臺(tái)，為創(chuàng)新藥的研究和開發(fā)提供全流程“一站式”服務(wù)。深圳博瑞醫(yī)藥地處深圳福田保稅區(qū)，毗鄰香港，為粵港澳大灣區(qū)的中心地帶，致力于成為從創(chuàng)新藥企業(yè)的早期服務(wù)到產(chǎn)品上市的系統(tǒng)服務(wù)平臺(tái)，力爭(zhēng)成為創(chuàng)新生物制藥企業(yè)騰飛的引擎。深圳博瑞醫(yī)藥由醫(yī)藥行業(yè)資深從業(yè)者引領(lǐng)，擁有歐美、澳洲、港澳以及中國(guó)的教育和從業(yè)經(jīng)歷。管理團(tuán)隊(duì)知識(shí)淵博，經(jīng)驗(yàn)豐富，涵蓋藥物的早期發(fā)現(xiàn)，臨床前/臨床研究等。公司竭誠(chéng)為客戶服務(wù)，秉承海納百川，集思廣益，博采眾長(zhǎng)，合作共贏的理念，為創(chuàng)新制藥企業(yè)提供涵蓋從新藥立項(xiàng)、靶點(diǎn)驗(yàn)證、藥物設(shè)計(jì)合成、生物活性評(píng)估、藥理藥代研究、中美臨床申報(bào)，依托博濟(jì)醫(yī)藥集團(tuán)開展臨床研究，上市申請(qǐng)和上市后再評(píng)價(jià)等服務(wù)。旨在打造大灣區(qū)乃至國(guó)內(nèi)具有特色的創(chuàng)新藥平臺(tái)。作為深圳福田生物醫(yī)藥研發(fā)公共服務(wù)平臺(tái)的管理公司，充分利用國(guó)際醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)園的核心區(qū)位優(yōu)勢(shì)和深圳的政策優(yōu)勢(shì)，服務(wù)和攜手入駐企業(yè)共同打造生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)新高地。關(guān)于博濟(jì)醫(yī)藥 臨床研究服務(wù)：博濟(jì)醫(yī)藥擁有一支規(guī)模龐大、專業(yè)成熟的臨床研究隊(duì)伍，可提供包括醫(yī)學(xué)、項(xiàng)目管理、監(jiān)查、稽查、數(shù)據(jù)管理和統(tǒng)計(jì)分析、生物樣本檢測(cè)在內(nèi)的臨床試驗(yàn)全流程解決方案。截至2020年，博濟(jì)醫(yī)藥服務(wù)的客戶超1000家，完成800多項(xiàng)臨床試驗(yàn)項(xiàng)目，助力客戶獲得新藥證書60多項(xiàng)、生產(chǎn)批件超過80項(xiàng)。在有豐富的臨床試驗(yàn)服務(wù)經(jīng)驗(yàn)，服務(wù)項(xiàng)目涵蓋臨床研究各個(gè)領(lǐng)域，在腫瘤、肝病、消化等創(chuàng)新藥領(lǐng)域擁有獨(dú)特的臨床服務(wù)體系。博濟(jì)醫(yī)藥在全國(guó)設(shè)有40多個(gè)臨床監(jiān)查網(wǎng)點(diǎn)，與全國(guó)近600個(gè)臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)展開合作，并運(yùn)用ORACLE OC/RDC及CTMS系統(tǒng)，控制臨床數(shù)據(jù)采集的及時(shí)性、管理臨床試驗(yàn)過程的規(guī)范性。

近日，博濟(jì)醫(yī)藥子公司廣州博濟(jì)生物醫(yī)藥科技園有限公司自主開發(fā)的他達(dá)拉非原料藥（登記號(hào)Y20210000073）和自主開發(fā)的無水硫酸鈉原料藥（登記號(hào)Y20200001480）在國(guó)家藥品監(jiān)督管理局成功備案登記。他達(dá)拉非是PDE5的選擇性抑制劑，適應(yīng)癥為治療男性勃起功能障礙（ED，Erectile Dysfunction）和治療男性勃起功能障礙（ED）合并良性前列腺增生（BPH，Benign Prostatic Hyperplasia）的癥狀和體征。無水硫酸鈉是一種鹽類瀉藥，用于導(dǎo)瀉。本品不易為腸道吸收，易溶于水，可在腸內(nèi)形成高滲鹽溶液，從而保持水分，擴(kuò)張腸道，增強(qiáng)蠕動(dòng)，且具有化學(xué)刺激作用，但不損害腸黏膜。本品在腸道內(nèi)不吸收，服用后隨糞便排除。博濟(jì)生物醫(yī)藥科技園目前可提供他達(dá)拉非、無水硫酸鈉原料藥的生產(chǎn)、銷售和技術(shù)轉(zhuǎn)讓服務(wù)，歡迎國(guó)內(nèi)外客戶垂詢。聯(lián)系人：田海根 聯(lián)系方式：020-66266009 19866138656

此前，“袁來如此”專欄就抗體藥物和靶標(biāo)生物分析數(shù)據(jù)的具體應(yīng)用以及mAb和L的結(jié)合可能產(chǎn)生的問題展開了詳細(xì)介紹(袁來如此｜大分子生物分析概論（七_(dá)）上：LBA測(cè)定抗體藥物與其靶標(biāo)的總/游離濃度)，本期將延續(xù)上期內(nèi)容，重點(diǎn)關(guān)注抗體藥物的定量和靶配體的生物分析方法。“袁來如此”專欄系廣州博濟(jì)醫(yī)藥微信公眾號(hào)打造的科普學(xué)術(shù)專欄，內(nèi)容均為博濟(jì)醫(yī)藥子公司深圳博瑞副總經(jīng)理袁智博士原創(chuàng)。4.抗體藥物的定量分析方法雖然可以設(shè)計(jì)LBA用來測(cè)量mAbfree或mAbtotal，但受試劑限制、樣本稀釋等影響，并不能確定該方法是否僅僅測(cè)定mAbfree。因此，可以采取測(cè)定mAbtotal的策略。mAbtotal和mAbfree的分析方法見表6，典型的ELISA檢測(cè)格式見圖2。表6. 設(shè)計(jì)用于測(cè)定推定的總體和游離的單克隆抗體的測(cè)試格式圖 2. 典型的測(cè)定mAbtotal或mAbfree的ELISA示意圖。mAbtotal的測(cè)定方法：a. mAbtotal：捕獲抗體non-inhibitory anti-CDR，檢測(cè)抗體anti-hu IgG。b. mAbtotal：與L預(yù)孵育轉(zhuǎn)化為mAbtotal-L，捕獲抗體non-inhibitory anti-L，檢測(cè)抗體anti-human IgG 或non-inhibitory anti-CDR。mAbfree的分析方法：c.二價(jià)mAbfree:與L作為捕獲及檢測(cè)的橋接分析方法。d.用于二價(jià)和單價(jià)的mAbtotal-L的捕獲與檢測(cè)。通用格式:用于測(cè)量mAbtotal由于特異性試劑通常是不可及的，所以在臨床前階段通常采用測(cè)定mAbtotal的“通用”分析方法。為了與試驗(yàn)物種IgGs的交叉反應(yīng)最小化，可以使用抗輕鏈（anti-light-chain）和/或亞型特異性（subclass-specific）試劑（例如圖2的a、b使用抗Fc試劑）。同樣的方法可以用于多種動(dòng)物和不同的候選藥物，但是對(duì)于每個(gè)物種，仍然需要驗(yàn)證每個(gè)mAb方法。“通用”分析方法可以作為一種“現(xiàn)成的（off-the-shelf）”方法使用，在早期開發(fā)中，僅需要很少的優(yōu)化（在確定特定的測(cè)試試劑之前）。然而，這種格式的分析方法不適用于臨床樣本的檢測(cè)，因?yàn)槠渲泻衜g/mL級(jí)別的人體內(nèi)源性IgG的干擾，需要外加待測(cè)物，回收實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)來確認(rèn)無內(nèi)源性組分的干擾。此外，該方法對(duì)活性（active）mAb藥物沒有特異性，但可能會(huì)與變性了的（denatured）、化學(xué)或蛋白酶降解后的mAb發(fā)生反應(yīng)。互補(bǔ)配對(duì)格式:用于mAbtotal或mAbfree的分析互補(bǔ)配對(duì)的格式使用的非抑制性抗CDR抗體試劑（抗體試劑識(shí)別mAb超可變區(qū)域上不參與L結(jié)合位點(diǎn)的抗原表位）和通用試劑方法是一種可以用于臨床樣本的檢測(cè)方法（例如,圖2a使用anti-mAb試劑）。在臨床樣本中，這種互補(bǔ)決定區(qū)域(complementarity-determining regions，CDR)的抗原表位不會(huì)出現(xiàn)在內(nèi)源性人類IgG上。但是卻很難獲得這樣的non-inhibitory anti-CDR mAb試劑。另外，如果使用多克隆抗體試劑，在藥物開發(fā)項(xiàng)目的生命周期中，維護(hù)試劑批次間的一致性也是一個(gè)挑戰(zhàn)。對(duì)特異于mAbfree的測(cè)試格式，一對(duì)試劑中至少有一個(gè)試劑必須與待測(cè)物的同一位點(diǎn)結(jié)合。這些試劑可能是與L競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合的anti-idiotypic抗體（即inhibitory anti-ids）或者是L本身（圖2c， d）。這種分析方式的一個(gè)變種源自試劑的組合應(yīng)用（例如，“橋接bridging”格式中，使用相同的試劑捕獲和檢測(cè)mAb，L作為捕獲試劑，與anti-idiotypic抗體進(jìn)行結(jié)合檢測(cè)，反之亦然）。橋接格式的一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是為了能夠被檢測(cè)到，mAb必須要有兩個(gè)functionally free結(jié)合位點(diǎn)。使用L的捕獲方式要求mAb只有一個(gè)供檢測(cè)的游離結(jié)合位點(diǎn)，并且對(duì)游離和部分游離的藥物都有特異性。但分析結(jié)果并沒有揭示這兩種形式的相對(duì)比例。 圖 2. 典型的測(cè)定mAbtotal或mAbfree的ELISA示意圖在mAbfree的競(jìng)爭(zhēng)式分析格式中，標(biāo)記的mAb（例如biotin或horseradish peroxidase標(biāo)記的）允許與樣本中未標(biāo)記的mAb競(jìng)爭(zhēng)，以結(jié)合特定的捕獲試劑。標(biāo)記的mAb的數(shù)量將與樣本中mAb的數(shù)量成反比。但是競(jìng)爭(zhēng)式方法可能不如非競(jìng)爭(zhēng)式方法的穩(wěn)健性好。獲得mAbfree真正價(jià)值的挑戰(zhàn)雖然mAbfree代表?yè)碛形锘钚缘男问剑撬幋鷦?dòng)力學(xué)家們的首選，但實(shí)際上，即使是設(shè)計(jì)良好的分析方法，對(duì)體內(nèi)mAbfree濃度的定量也存在著挑戰(zhàn)性。正如《結(jié)合平衡和對(duì)mAbtotal/mAbfree分析方法的挑戰(zhàn)》中所討論的，樣品采集條件、處理過程或分析方法都可以對(duì)平衡做出干擾影響，改變mAbfree的比例。作為替代方法，樣品中mAbfree、Lfree和mAb-L的濃度可由mAbtotal和Ltotal來計(jì)算。但是計(jì)算是以平衡方程為基礎(chǔ)的，這需要對(duì)體內(nèi)平衡解離常數(shù)（Kd）有很好的估算。因?yàn)閯?dòng)態(tài)平衡將隨著不同的mAb和相應(yīng)的L濃度而發(fā)生變化，所以需要在存在過量L的情況下檢測(cè)mAb，然后根據(jù)經(jīng)驗(yàn)判定它確實(shí)是mAbtotal或mAbfree的測(cè)試方法。圖3展示了測(cè)試L對(duì)mAb干擾的示例。以不同的摩爾比預(yù)孵育L和mAb，達(dá)到平衡后，用特定ELISA來測(cè)定mAb的濃度。以L/mAb的摩爾比為X軸，抑制率為Y軸繪圖。對(duì)于mAbfree的測(cè)定，IC50將接近1。但需要注意的是，用于測(cè)試的重組L可能不能完全與其內(nèi)源性形式一樣地結(jié)合mAbfree，而導(dǎo)致IC50偏離真實(shí)值。圖 3. L干擾mAb的測(cè)試。a. mAbfree的分析方法的示例：L/mAb摩爾比在大約0.7時(shí)的抑制率為50%；b. mAbtotal的分析方法的示例：L/mAb摩爾比約為300時(shí)，抑制率為50%。此外，選擇一致和穩(wěn)健的分析方法來支持mAb產(chǎn)品的臨床開發(fā)也很重要。如果需要改變方法，應(yīng)同時(shí)使用外加藥物的樣本和真實(shí)的研究樣本進(jìn)行方法比較，以確定改變分析方法對(duì)PK數(shù)據(jù)的影響。5.靶配體的生物分析方法總靶標(biāo)配體(Ltotal)的分析方法Ltotal展示了有關(guān)mAb對(duì)L累積的影響的信息。由于mAb的半衰期通常比循環(huán)系統(tǒng)中L的半衰期長(zhǎng)，給藥后形成的mAb-L可能不會(huì)像Lfree那樣快速清除。此外，在某些情況下，作為給藥后的響應(yīng)，膜受體形式中L表達(dá)的上調(diào)或可溶性L的合成可能增加血液循環(huán)中L的濃度。用于Ltotal的分析方法有多種。表7列舉了相關(guān)方法并總結(jié)了這些方法的應(yīng)用和局限性。表7.臨床前和臨床開發(fā)階段中，測(cè)定Ltotal的方法典型的用于Ltotal的分析方法如圖4所示。為了測(cè)定Ltotal，可以使用針對(duì)與mAb不同的特異性抗原表位的抗L抗體（非抑制性）(圖4b)。在這種方法中，如果抗L試劑與mAb的識(shí)別區(qū)域重疊，mAb可能會(huì)干擾分析，導(dǎo)致檢測(cè)值偏低。相反，mAb可能與L形成復(fù)合物，并增強(qiáng)檢測(cè)信號(hào)，導(dǎo)致檢測(cè)值偏高。對(duì)于分析Ltotal來說，稀釋樣本可能會(huì)增加mAb-L復(fù)合物的解離，也可使用預(yù)處理將結(jié)合型的L轉(zhuǎn)化為L(zhǎng)free(圖4a)。分離方法（dissociation methods）取決于mAb對(duì)于L的變性（relative denaturation）。圖4.典型的Ltotal夾心式ELISA方法示意圖. a. 實(shí)驗(yàn)前的預(yù)處理解離mAb-L復(fù)合物。B. 未進(jìn)行預(yù)處理解離。符號(hào)與圖2a、b相同。游離靶標(biāo)配體Lfree的分析方法在給藥過程中，監(jiān)測(cè)Lfree對(duì)確定有效劑量具有重要意義。試劑的選擇對(duì)Lfree分析的影響與對(duì)mAbfree相似，但更加復(fù)雜。在許多情況下，與膜結(jié)合的L相比，組織中的可溶性L含量較低，可能需要高靈敏度的分析方法來測(cè)定Lfree的正常水平。在大多數(shù)情況下，mAb/L的高摩爾比對(duì)給藥后Lfree定量分析的準(zhǔn)確度造成了一定的阻礙。但即便如此，仍可獲得Lfree的相對(duì)趨勢(shì)，以提供有關(guān)mAb的影響和維持所需的Lfree水平等有價(jià)值的信息。表8總結(jié)了臨床前和臨床階段用于測(cè)定Lfree的方法，圖5展示了典型的測(cè)定Lfree的分析方法。特異性的抑制性抗L抗體或mAb（或mAb模擬物）可作為捕獲試劑，而特異性的非抑制性抗L抗體可作為檢測(cè)試劑（圖5a）。但是解離結(jié)合形式的L（bound form of L）的樣本處理步驟和分析條件可能會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)值偏高(見《結(jié)合平衡和總/游離型分析的挑戰(zhàn)》)。表8. 測(cè)定游離靶標(biāo)配體的方法圖5. 典型的測(cè)定Lfree的夾心式ELISA示意圖。a.無預(yù)處理分離；b.在ELISA之前，使用μ-affinity柱子分離游離的和結(jié)合的L。符號(hào)與圖2a、b中相同。另一種方法是通過分子篩、固相萃取或親和分離法，在LBA分析之前，去除結(jié)合形式的L(圖5b，如使用G蛋白、A蛋白或抗人FC柱)。然而，由于柱子或過濾器表面的吸附作用，這些額外的步驟可能會(huì)帶來誤差，而且在這些分離過程中也可能會(huì)發(fā)生解離。因此，Lfree的數(shù)據(jù)只能顯示出相對(duì)的趨勢(shì)，而不能作為絕對(duì)的定量結(jié)果。在使用樣本制備方法開發(fā)Ltotal和Lfree測(cè)定方法的時(shí)候，需要重點(diǎn)評(píng)估在預(yù)期濃度范圍內(nèi)的Lrecovery（L的回收率）以及在預(yù)期有或沒有mAb的基質(zhì)中，評(píng)估來自樣本基質(zhì)和其它相關(guān)結(jié)合蛋白的干擾。重要的是要確認(rèn)在使用最終方法時(shí)測(cè)定的值是Ltotal還是Lfree。可以采用不同mAb/L摩爾比進(jìn)行干擾測(cè)試，類似于圖3所示的實(shí)驗(yàn)。圖 3. L干擾mAb的測(cè)試靶標(biāo)配體的相對(duì)測(cè)定方法測(cè)定靶標(biāo)配體 (Ltotal或者Lfree)可以提供一些重要的信息，包括證明mAb與L的體內(nèi)結(jié)合、靶點(diǎn)占用率、有效的mAb濃度以及PK/PD關(guān)系。測(cè)定L的準(zhǔn)確度取決于標(biāo)準(zhǔn)參照（比）物和試劑的質(zhì)量。當(dāng)不能獲得內(nèi)源性L的標(biāo)準(zhǔn)參照（比）物時(shí)，可以使用重組或合成的L標(biāo)準(zhǔn)參照（比）物。定量的準(zhǔn)確度取決于標(biāo)準(zhǔn)參照（比）物與內(nèi)源性待測(cè)物這二者與測(cè)試試劑結(jié)合的相對(duì)活性（relative binding activity）。在分析方法驗(yàn)證的過程中，應(yīng)評(píng)估Ltotal的平行性，以確定該方法是否能像標(biāo)準(zhǔn)參照（比）物一樣識(shí)別內(nèi)源性的L。如果缺乏平行性數(shù)據(jù)，該分析方法只能是半定量的，所產(chǎn)生的數(shù)據(jù)必須在此背景下進(jìn)行解釋。當(dāng)沒有足夠高濃度的內(nèi)源性L樣本來評(píng)估平行性時(shí)，解釋數(shù)據(jù)時(shí)應(yīng)該謹(jǐn)慎使用絕對(duì)濃度這樣的術(shù)語。在這種情況下，L的相對(duì)變化趨勢(shì)將更加可靠。6.結(jié)論和觀點(diǎn)為了適當(dāng)?shù)厥褂煤徒忉屔锓治鰯?shù)據(jù)，了解數(shù)據(jù)的可靠性和局限性是至關(guān)重要的。在LBA方法中，捕獲和檢測(cè)試劑是決定該方法的特異性（針對(duì)游離的、結(jié)合的或總濃度的特異性）的關(guān)鍵組成成分。理解mAb/L的比值和動(dòng)態(tài)平衡對(duì)于選擇最合適的格式進(jìn)行方法開發(fā)是至關(guān)重要的。此外，在疾病模型或特定患者群體中，靶標(biāo)配體的狀況可能與健康對(duì)照群體有著非常不同的情況，所以了解在不同物種和疾病狀態(tài)中出現(xiàn)的mAb/L比值的可變性也很重要。即使擁有高度表征的試劑，也應(yīng)該理解mAb-L在體內(nèi)是以動(dòng)態(tài)平衡的方式存在的，因此體外（ex vivo）的測(cè)試條件（例如樣本稀釋和孵育時(shí)間）會(huì)影響mAb和L的定量以及它們兩者之間的平衡，可以通過研究mAb-L平衡，分析操作步驟，評(píng)估實(shí)驗(yàn)結(jié)果，來判斷它們是否真實(shí)反映了研究樣本中的結(jié)合關(guān)系（binding relationships）。本文的表格中所列出的樣品處理策略和定量方法，經(jīng)常適用于方法開發(fā)，其目的是定量分析游離（free）的、總體（total）的和結(jié)合了（bound）的mAb和L的各種形式。mAb和L的濃度數(shù)據(jù)一般用來在藥物開發(fā)的不同階段幫助做出具體的決策。在臨床前研究中，可能沒有相關(guān)試劑用于開發(fā)定量mAbfree的方法。mAbfree和mAbtotal（當(dāng)沒有檢測(cè)mAbfree的方法時(shí)）的定量數(shù)據(jù)將用于評(píng)估系統(tǒng)暴露量-時(shí)間過程與毒性研究結(jié)果的關(guān)系，并預(yù)測(cè)人體起始劑量的安全余量。通常情況下，mAb給藥的劑量會(huì)使得血液中mAb的濃度遠(yuǎn)超L，因而mAbtotal與mAbfree相近并可以作為mAb活性的指標(biāo)，進(jìn)而基于PK-PD模型計(jì)算來決定采用多大劑量。在臨床評(píng)估中，會(huì)使用特定試劑測(cè)定mAbfree或mAbtotal以描述mAb藥物在人體中的分布情況，并將mAb的暴露量與其安全性和有效性聯(lián)系起來。同時(shí)，也有助于更好地理解mAb-L的動(dòng)力學(xué)，為后期臨床研究時(shí)選擇給藥方案提供相關(guān)信息。在藥物開發(fā)中，越來越多的研究人員選擇使用靶標(biāo)配體（L）的濃度數(shù)據(jù)來指導(dǎo)決策。例如，Lfree的數(shù)據(jù)可用于指導(dǎo)給藥劑量和頻率的選擇。對(duì)L動(dòng)力學(xué)的理解有助于確定維持受體占用率所需的mAbfree的有效濃度。在許多情況下，由于Lfree的濃度很低，并且可能隨分析條件的變化而變化，定量數(shù)據(jù)可能是不可靠的。另一種方法是考查給藥后Lfree的變化趨勢(shì)，而不是依賴其絕對(duì)值。Ltotal提供了mAb活性的證據(jù)，此外，如果mAb–L的結(jié)合改變了靶點(diǎn)表達(dá)量(例如L的高度積累)，可能需要提醒研究人員注意安全性的問題。可以在PK/PD模型中，使用Ltotal來推斷Lfree的濃度。根據(jù)Ltotal、Lfree以及mAbfree或者mAbtotal的適當(dāng)信息，通過PK/PD建模來估計(jì)Lfree的體內(nèi)結(jié)合親和力和抑制作用，這可能有助于給藥劑量和頻率的選擇。由于待測(cè)物的形態(tài)(游離/總/復(fù)合，free/total/complex)和用于定量這些形態(tài)的生物分析方法會(huì)影響藥物暴露量-時(shí)間過程的確定，因此在整個(gè)藥物開發(fā)計(jì)劃的背景下，對(duì)生物分析數(shù)據(jù)的解釋保持一致是至關(guān)重要的。此外，設(shè)計(jì)能夠解決相關(guān)科學(xué)問題的生物分析方法也很重要。由于每個(gè)靶標(biāo)及其相關(guān)疾病生物學(xué)的復(fù)雜性和獨(dú)特性，應(yīng)與數(shù)據(jù)的最終用戶協(xié)商，為每個(gè)藥物開發(fā)項(xiàng)目精心制定定量相關(guān)形式的生物分析策略，并考慮藥物靶標(biāo)生物學(xué)、藥物開發(fā)階段和包括試劑可及性在內(nèi)的實(shí)際挑戰(zhàn)。當(dāng)前滿足所有要求且令人滿意的生物分析方法少之又少，還需要更多的努力來開發(fā)相關(guān)方法，所以目前大多數(shù)情況下只能使用不太理想的分析方法來支持藥物開發(fā)的某個(gè)階段。在這種情況下，應(yīng)該清楚地向所有利益攸關(guān)方傳達(dá)使用不太理想的分析方法時(shí)的注意事項(xiàng)、對(duì)數(shù)據(jù)的影響和項(xiàng)目的相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)，以確保做出恰當(dāng)?shù)臎Q策。在一些文獻(xiàn)中，有些學(xué)者使用串聯(lián)高效色譜-質(zhì)譜(LC-MS/MS)方法來定量mAb。此種方法涉及酶消化，將mAb轉(zhuǎn)化成小的肽段（以保持在一定的質(zhì)荷比范圍內(nèi)）。需要注意的是，mAb必須在酶消化前變性，確保mAb與L的分離。因此，LC-MS/MS方法可用于定量mAbtotal。用于蛋白質(zhì)定量的LC-MS/MS方法將在后續(xù)文章中探討。雖然本文所述的問題和例子可適用于多種類型的生物藥，但為了明確起見，本文重點(diǎn)關(guān)注的是mAb及其相關(guān)的靶標(biāo)配體L。對(duì)于其它生物藥的復(fù)雜性，如蛋白質(zhì)、肽和寡核苷酸及其相互作用，還需要進(jìn)一步考慮擴(kuò)展這里提出的概念，并在未來探討。就實(shí)際的分析方法開發(fā)和結(jié)果數(shù)據(jù)的適當(dāng)運(yùn)用而言，提出明確和果斷的建議是一個(gè)巨大的挑戰(zhàn)。本文試圖確定在藥物開發(fā)的每個(gè)階段數(shù)據(jù)的合用性，以便開發(fā)可以用于特定目的的定量分析方法。更重要的是強(qiáng)調(diào)了分析方法的局限性（對(duì)于適當(dāng)?shù)亟忉尯褪褂脭?shù)據(jù)而言）。后續(xù)有機(jī)會(huì)將繼續(xù)探討mAbs和非mAbs生物藥的相關(guān)問題和挑戰(zhàn)，如結(jié)合mAb的抗藥物抗體（ADA），敬請(qǐng)關(guān)注。特別聲明本文如有疏漏和誤讀相關(guān)指南和數(shù)據(jù)的地方，請(qǐng)讀者評(píng)論和指正。所有引用的原始信息和資料均來自已經(jīng)發(fā)表學(xué)術(shù)期刊、 官方網(wǎng)絡(luò)報(bào)道等公開渠道, 不涉及任何保密信息。參考文獻(xiàn)的選擇考慮到多樣化但也不可能完備。歡迎讀者提供有價(jià)值的文獻(xiàn)及其評(píng)估。擴(kuò)展閱讀參 考 文 獻(xiàn)1. 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